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胎牛血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)及預(yù)篩選

點(diǎn)擊次數(shù):754更新時(shí)間:2023-03-13
  雖然我們對胎牛血清的功能清楚,但血清的成分非常復(fù)雜,時(shí)至今日對其準(zhǔn)確的成分、含量及其作用機(jī)制仍不清楚,尤其是對其中一些多肽類生長因子、激素和脂類等尚未充分認(rèn)識。
  
  其次血清都是批量生產(chǎn),各批量之間差異很大,而且血清保存期至多一年,因此,要保證每批血清的相似性極為困難,在細(xì)胞培養(yǎng)中避免不了要做血清篩選,那如何篩選血清呢?
  
  血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn):
  
  1、內(nèi)毒素標(biāo)準(zhǔn)為不高于5EU/ml。
  
  2、總蛋白含量胎牛血清一般范圍是30-40mg/ml,數(shù)值偏高偏低都會影響實(shí)驗(yàn)的正常進(jìn)行。
  
  3、血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)為不高于20mg/dl。
  
  4、pH。國產(chǎn)血清、大多高于7.5,進(jìn)口胎牛血清,大多低于7.5,根據(jù)PH的高低可用來初步鑒別血清的來源。
  
  5、微生物。包括細(xì)菌、霉菌、支原體、噬菌體、各類病原性病毒等,大多都能清除。大腸桿菌噬菌體無法過濾,很難徹底清除,但對血清質(zhì)量影響不大。病原性病毒,在國產(chǎn)血清中幾乎90%以上都存在,是影響國產(chǎn)血清質(zhì)量的重要原因之一。
  
  在實(shí)際篩選時(shí),主要從血清外觀和實(shí)驗(yàn)操作時(shí)細(xì)胞的生長狀態(tài)進(jìn)行。
  
  從外觀上:
  
  1、顏色:根據(jù)血紅蛋白含量的不同,胎牛血清可表現(xiàn)出黃色或紅色,這個(gè)指標(biāo)的意義在于能體現(xiàn)出采血過程的嚴(yán)謹(jǐn)規(guī)范程度。胎牛血清或多或少總有點(diǎn)溶血,因?yàn)樘ヅQ迥δ懿睿t細(xì)胞容易破裂;
  
  2、澄清度:高質(zhì)量的胎牛血清由于蛋白和脂類等物質(zhì)含量低,表現(xiàn)為稀薄、清淡;
  
  3、血清沉淀:血清中的沉淀是由纖維蛋白的凝聚產(chǎn)生,對血清質(zhì)量沒有影響,沉淀的產(chǎn)生原因跟加工生產(chǎn)方式、是否反復(fù)凍融密切相關(guān),在實(shí)驗(yàn)操作中可能會對細(xì)胞觀察產(chǎn)生影響。
  
  從性能上:
  
  1、細(xì)胞形態(tài),在進(jìn)行血清篩選時(shí)首先觀察細(xì)胞的生長形態(tài)是否產(chǎn)生明顯變化,以及觀察貼壁細(xì)胞的貼壁情況,細(xì)胞在不同血清培養(yǎng)中可能會出現(xiàn)形態(tài)上的差異;
  
  2、倍增時(shí)間,一般情況下會選擇倍增時(shí)間短的血清,值得注意的是血清的影響會傳至5代,在進(jìn)行測試時(shí),先培養(yǎng)五代后進(jìn)行計(jì)倍增時(shí)間的計(jì)算;
  
  3、克隆形成率,測試時(shí)一般選50、100、200個(gè)細(xì)胞進(jìn)行平板克隆測試,平均5d左右換一次液,兩周后染色計(jì)數(shù),對比克隆形成情況。
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